液相色譜儀流動(dòng)相比例怎么設(shè)置，液相色譜儀作為現(xiàn)代分析化學(xué)中的重要工具，其分離效果和準(zhǔn)確性很大程度上取決于流動(dòng)相的合理配置。流動(dòng)相的選擇和比例設(shè)置不僅影響樣品的分離度、峰形和靈敏度，還關(guān)系到儀器的穩(wěn)定運(yùn)行和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，今天天恒就帶大家來了解液相色譜儀流動(dòng)相比例怎么設(shè)置。

在液相色譜儀的使用中，流動(dòng)相通常由有機(jī)溶劑和水或緩沖溶液組成。常見的有機(jī)溶劑包括甲醇、乙腈等，它們的選擇和比例設(shè)置需根據(jù)樣品的性質(zhì)、分離目標(biāo)以及色譜柱的類型等因素綜合考慮。首先，流動(dòng)相需對(duì)樣品具有一定的溶解能力，確保樣品組分不會(huì)在色譜柱中沉淀或長時(shí)間保留。當(dāng)流動(dòng)相的溶解度不足時(shí)，應(yīng)盡量選用流動(dòng)相中含有的比例較大的成分，以減輕進(jìn)樣對(duì)流動(dòng)相的影響，保持基線穩(wěn)定。

在實(shí)際操作中，流動(dòng)相的比例設(shè)置通常遵循“三倍規(guī)則”。這一規(guī)則指的是，在調(diào)整有機(jī)溶劑的比例時(shí)，每減少10%的有機(jī)溶劑（如甲醇或乙腈）的量，保留因子約增加3倍。例如，若初始流動(dòng)相為90%的乙腈和10%的水，當(dāng)乙腈的比例減少到80%時(shí)，保留因子將大約增加3倍。這一規(guī)則為實(shí)驗(yàn)人員提供了一個(gè)有效的調(diào)整方法，可以快速地觀察到分離效果的變化，并根據(jù)需要進(jìn)行微調(diào)。

除了“三倍規(guī)則”外，流動(dòng)相的比例設(shè)置還需考慮色譜柱的類型和樣品的性質(zhì)。對(duì)于反相色譜柱，通常使用高比例的有機(jī)溶劑來提高分離效果；而對(duì)于正相色譜柱，則更多地使用水或緩沖溶液作為流動(dòng)相。此外，當(dāng)分析弱酸（3<pKa<7）或弱堿（7<pKa<8）樣品時(shí)，通過調(diào)整流動(dòng)相的pH值可以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，從而改善峰形。

在流動(dòng)相的配置過程中，溶劑的混合方式和步驟也至關(guān)重要。溶劑的混合通常按體積比（V/V）或重量比（W/W）進(jìn)行。由于溶液的體積隨溫度變化，按重量比混合的重復(fù)性好，但操作繁瑣，因此常用體積比混合。在特殊情況下，如高粘度溶液混合時(shí)，也可采用重量-體積比（W/V）的方法。在混合溶劑時(shí)，應(yīng)確保充分搖勻，以避免局部濃度不均導(dǎo)致分離效果不佳。

此外，流動(dòng)相的物化性質(zhì)應(yīng)與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。例如，使用UV檢測(cè)器時(shí)，應(yīng)選擇對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制流動(dòng)相。當(dāng)流動(dòng)相組成溶劑均無法滿足要求時(shí)，選取的溶劑應(yīng)保證在設(shè)定波長內(nèi)無紫外吸收，以避免對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾。

流動(dòng)相的沸點(diǎn)也是需要考慮的因素之一。沸點(diǎn)過低的流動(dòng)相容易在實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生氣泡，影響分離效果和儀器的穩(wěn)定運(yùn)行。因此，在選擇流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)確保其沸點(diǎn)適中，避免產(chǎn)生氣泡。

在流動(dòng)相配制好后，還需要進(jìn)行脫氣處理。脫氣的目的是去除溶解在流動(dòng)相中的微量氣體，這些氣體不僅會(huì)影響分離效果，還可能與樣品發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。常用的脫氣方法有加熱煮沸、抽真空、超聲、吹氦等。其中，氦氣脫氣效果最佳，但成本較高。在選擇脫氣方法時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和成本考慮進(jìn)行權(quán)衡。

在液相色譜儀的日常使用中，還需注意流動(dòng)相的儲(chǔ)存和更換。流動(dòng)相瓶必須清洗干凈，含水流動(dòng)相需定期更換以避免長菌。純水應(yīng)每2天更換一次，以確保流動(dòng)相的純凈度和穩(wěn)定性。更換流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)及時(shí)更新流動(dòng)相標(biāo)簽，并注意清洗相關(guān)部件，如吸濾頭、泵密封墊等，以避免交叉污染和儀器故障。

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液相色譜儀流動(dòng)相比例的設(shè)置是一個(gè)復(fù)雜而細(xì)致的過程，需要綜合考慮樣品的性質(zhì)、色譜柱的類型、檢測(cè)器的要求以及實(shí)驗(yàn)條件等多個(gè)因素。《實(shí)驗(yàn)室儀器中液相色譜儀色譜峰拖尾的原因是什么？一文帶你了解【知識(shí)普及】》