PCR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

1.操作簡(jiǎn)便

應(yīng)用PCR方法的早期階段操作縈瑣，因?yàn)槭褂玫木酆献硎谴竽c桿菌DNA聚合酶I的大片段，即Klenow片段，而不是耐高溫的TaqDNA聚合酶，而且操作也未實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。目前使用的是耐高溫的TaqDNA聚合酶，其操作也實(shí)行了電腦控制的DN八擴(kuò)增儀的自動(dòng)化，只要將擴(kuò)增反應(yīng)所需要的特定程序輸入DNA自動(dòng)擴(kuò)增儀，操作臺(tái)PCR操作箱把反應(yīng)所需要的全部材料混合均勻，置入儀器內(nèi)，反應(yīng)就會(huì)按照所輸入的正確程序進(jìn)行。如果需要，還可隨時(shí)予以調(diào)整。

2. 省時(shí)

應(yīng)用TaqDNA聚合酶時(shí)，單核昔酸摻入的速率較高，75℃一80℃時(shí)，每個(gè)酶分子每秒鐘可完成150個(gè)核昔合成.PCR每一周期需數(shù)分種，所以，一般取用20一30個(gè)周期能使目的DNA達(dá)到數(shù)百萬(wàn)倍擴(kuò)增的反應(yīng)只需數(shù)小時(shí)即可完成.在基因分離，突變體構(gòu)建，DNA測(cè)序等方面，PCR方法均較之常規(guī)方法快速得多.例如，乾蕓GENIN PCRroom-1st操作臺(tái)PCR操作箱用常規(guī)方法建立cDNA文庫(kù)或染色體DNA文庫(kù)來(lái)分離基因，需花幾個(gè)月時(shí)間，用PCR方法只要1一2個(gè)周;用M13法構(gòu)建突變體需l一2個(gè)月，用PCR法僅用數(shù)天;PCR方法擴(kuò)增的目的DN段可直接用作測(cè)序分析，較常用的通過(guò)克隆，培養(yǎng)擴(kuò)增，純化制備等步驟獲得測(cè)序片段更為簡(jiǎn)便，省時(shí)。

3.靈教度高

PCR產(chǎn)物的生成，是以指數(shù)方式增加的，所以欲擴(kuò)增pg量級(jí)的起始物到雌水平成放大真核細(xì)胞單拷貝基因，通過(guò)PCR方法都是不難完成的。PCR方法還可用單一雙倍體細(xì)胞，一根頭發(fā)，甚至單一精子進(jìn)行DNA定型。

4.特異性強(qiáng)

作為引物的寡聚核昔酸與模板結(jié)合的正確性是決定反應(yīng)產(chǎn)物是否特異的關(guān)鍵。TaqDNA聚合酶耐高溫的性質(zhì)，使得反應(yīng)中引物與模板退火的步驟可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的目的DN段也能保持很高的正確程度。

5.對(duì)原始材料質(zhì)t要求低

由于PCR技術(shù)有高靈敏度和強(qiáng)特異性，故僅含量(Pg,ng水平)的目的DNA的粗制品或者總DNA，就可以作為反應(yīng)起始材料來(lái)獲取目的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物。部分的降解的DNA材料也可以通過(guò)PCR多次反應(yīng)周期，最終得到所需的含全長(zhǎng)序列的DN段.用石蠟包埋的組織切片，甚至幾千年前出土的文物，只需經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)奶幚?，乾蕓GENIN PCRroom-1st操作臺(tái)PCR操作箱都可用PCR技術(shù)進(jìn)行目的DNA的擴(kuò)增，這樣就有可能對(duì)系統(tǒng)保存的病理材料進(jìn)行檢測(cè)，解決以前無(wú)法解決的問(wèn)題，同時(shí)，這一特性也使PCR技術(shù)應(yīng)用到考古學(xué)，人類學(xué)等領(lǐng)域成為可能。

6.PCR技術(shù)應(yīng)用范圍廣

PCR技術(shù)可應(yīng)用于核酸結(jié)構(gòu)和功能研究的各個(gè)領(lǐng)域，如DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定，基因突變，基因工程，蛋白質(zhì)工程及基因治療等各個(gè)方面，都有著重要的應(yīng)用.PCR技術(shù)的出現(xiàn)，使這些領(lǐng)域發(fā)生了顯著的變化。

PCR技術(shù)的缺點(diǎn)

1、假陽(yáng)性問(wèn)腸

如果PCR反應(yīng)系統(tǒng)中，既使污染一個(gè)拷貝的DN段，如果和引物結(jié)合以后，經(jīng)過(guò)擴(kuò)增反應(yīng)，則判為陽(yáng)性。但這種結(jié)果是一種假陽(yáng)性結(jié)果。因此，反應(yīng)系統(tǒng)中的樣品，試管，移液器及試管要求確實(shí)無(wú)DN段的污染，否則其結(jié)果判定十分困難。

2.單核普酸的錯(cuò)誤接人

由于TaqDNA聚合酶缺乏3"5’核酸外切酶的活性，因而不能糾正反應(yīng)中發(fā)生的錯(cuò)誤的核昔酸摻入;與大腸桿菌DNA聚合酶1的Klenow片段相比，用前者的反應(yīng)發(fā)生錯(cuò)誤摻入的較多.錯(cuò)誤核昔酸摻入的頻率還受反應(yīng)條件的影響，所以對(duì)僅由TaqDNA聚合醛引發(fā)的錯(cuò)誤摻入很難精確估計(jì).TindanK.R.估計(jì)是每9000個(gè)核昔酸摻入中發(fā)生一次錯(cuò)誤，乾蕓GENIN PCRroom-1st操作臺(tái)PCR操作箱而合成41000個(gè)核昔酸可能導(dǎo)致一次框碼移位。但是，這種錯(cuò)誤并不意味著PCR產(chǎn)物一定會(huì)發(fā)生序列改變，InnisM,A.發(fā)現(xiàn)，錯(cuò)誤摻入的堿基有終止鏈延伸作用的傾向，這就使得發(fā)生了的錯(cuò)誤不會(huì)再擴(kuò)大。這一點(diǎn)對(duì)PCR結(jié)果有利。